PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
PCR儀/基因擴增儀實際就是一個溫控設備,能在95℃,55℃,72℃之間很好地進行溫度控制。PCR儀/基因擴增儀又稱為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀.
PCR技術的本質是體外核酸擴增,加熱使雙鏈DNA解開螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復“變性→退火→引物延伸”過程至25~40個循環(huán),呈指數(shù)級擴大待測樣本中的核酸拷貝數(shù)。
PCR擴增時加入的引物利用熒光素進行標記,使引物和熒光探針同時與模板進行特異性結合,擴增結果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號并輸送到計算機分析處理系統(tǒng),實時輸出量化結果,這樣的PCR儀叫實時熒光定量PCR儀。
PCR儀/基因擴增儀的操作非常簡便,接通電源,儀器自檢,設置溫度程序或調出儲存的程序運行即可。